国家商检局关于对日出口冻鸡二氯二甲吡啶酚检验的通知 （一九九一年一月二十四日）

国家商检局关于对日出口冻鸡二氯二甲吡啶酚检验的通知

（一九九一年一月二十四日）

经多次反复验证已完成对日出口冻鸡二氯二甲吡啶酚的检验方法。现印发给你们，请按此方法检验放行出口。

检验取样：按1990年11月15日北京外贸、商检紧急会议商定的办法进行取样，即以生产日作批，每批不得少于一个样品，每个样品由相当于5-10只鸡的不同部位的肉组成。

在恢复出口检验时：（一）对一九九0年十二月底前生产的库存产品，暂不检验出口；（二）对出口货源要做到心中有数，在加强对养鸡场饲养用药、停药期的监督管理的基础上，对新加工生产的出口冻鸡肉经严格检验，合格后放行出口。

关于今年1-3月份日本厚生省重点监测的药残，望各局加紧方式验证，争取早日实施出口检验。

附件：　 鸡肉组织中二氯二甲吡淀酚残留量测定方法

1.适用范围

本方法适用于鸡肉组织中二氯二甲吡淀酚残留量的测定

2.方法原理

用甲醇提取鸡肉组织中的二氯二甲吡淀酚，提取液过滤后，经氧化铝、阴离子交换柱净化。洗脱液用重氮甲烷甲基化，生成的二氯二甲吡淀甲醚（3.5-二氯4-甲氧基-2.6-二甲基吡淀）用电子捕获气相色谱法测定。与标准比较，求出其含量。适用浓度为：鸡肉中0.01PPｍ以上。

3.试剂

3.1　甲醇：优级纯

3.2　苯：分析纯（重蒸馏）

3.3　1N　NａOH水溶液

3.4　2.4-二硝基氯苯（内标物）：优级纯

3.5　提取用苯：浓度为0.05G／ｍｌ的2.4-二硝基氯苯的苯溶液。

3.6　助滤剂：用甲醇清洗，风干。

3.7　氧化铝：层析用，中性，100-200目

3.8　阴离子交换树脂：Dａｗｅｘ1-Ｘ8100-200目Cｌ型或等效品

3.9　5％醋酸甲醇溶液：将25ｍｌ冰醋酸加到475ｍｌ甲醇中

3.10　无水硫酸纳：分析纯600℃灼烧4小时后置于干燥器中备用

3.11　重氮甲烷溶液：将装有氢氧化钾水溶液（浓度：0.6G／ｍｌ）10ｍｌ，乙醇35ｍｌ及乙醚10ｍｌ的混合液的双口蒸馏瓶置于磁力搅拌器加热板上的水浴中，水温70℃，将搅拌子放入瓶中，接上滴液漏斗和高效冷凝器，冷凝器后串连有两个125ｍｌ的烧瓶。在第二个烧瓶中放在10ｍｌ乙醚，且入口应插到乙醚液面以下。在冰水浴中冷却进两个接收瓶。边用磁力搅拌器搅拌边从滴液漏斗中滴加N-甲基-N-硝基-P-甲苯磺胺乙醚溶液（21.5G／140ｍｌ），滴完全部溶液的时间控制在20ｍｉN以上。当蒸馏液呈淡黄色时，停止蒸馏。将两个接收瓶中的液体合并，在70℃水浴上再蒸馏，其蒸馏液作为重氮甲烷溶液。此液密闭置于冰箱中保存，保存期为一个月。

3.12　二氯二甲吡淀酚标准溶液

3.12.1　二氯二甲吡淀酚标准贮备液-100ｕG／ｍｌ：精确称取二氯二甲吡淀酚分析用标准品100ｍG，用磁力搅拌器搅拌溶解于甲醇（2-3小时），定容至1000ｍｌ。

3.12.2　中间标准溶液（Ⅰ）-10ｕG／ｍｌ用移液管移取二氯二甲吡淀酚标准贮备液10ｍｌ于100ｍｌ容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

3.12.3　中间标准溶液（Ⅱ）-1G／ｍｌ用移液管移取中间标准溶液（Ⅰ）10ｍｌ放入100ｍｌ容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

3.12.4　工作溶液-0.1ｕG／ｍｌ：用移液管移取中间标准液（Ⅱ）10ｍｌ放入100ｍｌ容量瓶入，用甲醇稀释至刻度。

4.仪器

4.1　均质器

4.2　试管：13×100ｍｍ旋盖式耐压性试管，盖内衬硅胶垫

4.3　离心管：10×100ｍｍ带盖

4.4　旋转蒸发器：带抽真空装置和恒温水浴锅

4.5　氧化铝柱：称取6G氧化铝，装入内径为10ｍｍ的层析柱内

4.6　阴离子交换柱：将阴离子交换树脂伴以去离子水装入内径10ｍｍ的玻璃层析柱内，高度为1Cｍ。注入1N　NａOH水溶液100ｍｌ洗柱，然后用去离子水洗至中性。流速2ｍｌ／ｍｉN，

注入0.5ｍ　CHCOONａ水溶液100ｍｌ洗柱，用去离子水洗至中性后（流速2ｍｌ／ｍｉN）注入80％

甲醇50ｍｌ。放出甲醇至液面，略高于树脂层。

4.7　气相色谱仪带电子捕获检测器

4.7.1　色谱分析条件

4.7.1.1　温度：柱箱：160℃

进样品：220℃

检测器：240℃

4.7.1.2　载气：高纯氮，流速：65ｍｌ／ｍｉN

4.7.2　色谱柱：玻璃柱3.2ｍｍ×2ｍ

固定相为20％DC-200涂于Gａｓ　CHROｍ　Q载体（60-80目）。使用前于200℃活化24小时以上。

5.操作方法

5.1　试样分析

5.1.1　提取

取经搅碎的鸡肉试样20G（精确至0.1G）于均质杯中，加入甲醇50ｍｌ和助滤剂3G，高速均质3ｍｉｍ，在布氏漏斗上敷上2G助滤剂。抽滤经均质的样液，用40ｍｌ甲醇分2-3次洗涤均质杯并移入布氏漏斗中，将滤液并入100ｍｌ溶量瓶中，用甲醇定容至刻度。

5.1.2　净化

用移液管移取上述滤液20ｍｌ注入氧化铝柱并用10ｍｌ甲醇冲洗，将流出液移入阴离子交换柱，以1ｍｌ／ｍｉN的速度流出，用10ｍｌ甲醇冲洗柱内壁，弃去流出液。用20ｍｌ5％醋酸的甲醇　分两次洗脱二氯二甲吡淀酚，以1ｍｌ／ｍｉN的速度流出，流出液接收于25ｍｌ的溶量瓶内，用甲醇定容至刻度。

5.1.3　甲基化

用移液管移取上述洗脱液1ｍｌ于带旋盖的试管内，试管在旋转蒸发器上（水浴温度为55℃）真空蒸干（可通微弱空气流）。取出试管加入0.2ｍｌ80％，甲醇，微热使残渣溶解。冷至室温，加重氮甲烷溶液1ｍｌ拧紧旋盖使试管密封。于70℃水浴中加热5-10ｍｉN，加热时水浴液面应和反应液面相齐。取出试管冷却至室温，拧去旋盖，将试管固定在70℃水浴中，仅使试管圆形底部接触水面，加热2-3分钟，缓缓地蒸除醚液。加入0.1ｍｌN　NａOH溶液，5ｍｌ水和1.0ｍｌ提取用苯。盖好试管，用力摇动混合1ｍｉN，离心3ｍｉN。

将上层苯液转移至另一干燥的离心管中，加少量无水硫酸钠，振摇1ｍｉN，离心1ｍｉN。

5.1.4　色谱测定

取上述离心的苯溶液4μｌ注入气相色谱仪。测出二氯二甲吡淀甲醚峰高与内

标峰高的比值，由标准曲线推算出苯提取液中二氯二甲吡淀酚的浓度μG／ｍｌ。

5.2　标准曲线的绘制

分别取二氯二甲吡淀酚测定用标准溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.0，2.0ｍｌ于试管中，以下按5、1、3进行甲基化（不加1N　NａOH溶液），进样4μｌ进行色谱测定。根据所求得的色谱峰与内标峰的峰高比对应溶液的浓度μG／ｍｌ绘制标准曲线。

5.3　回收系数R

准确称取20.0G不含二氯二甲吡淀酚且经搅碎后的鸡肉组织，分别加入相当于0.0，0.1或0.5PPｍ的二氯二甲吡淀酚中间标准溶液（Ⅱ）分别0.0，2.0或10.0ｍｌ。按5.1操作且计算出平均回收系数：

由标准曲线查得的PPｍ值

R＝------------

加入的PPｍ值

5.4　结果计算

　6.25（G-G'）

动物组织中的二氯二甲吡淀酚PPｍ＝----------式中：G＝由标

　R

准曲线查得样品中二氯二甲吡啶酚的G／ｍｌ值；

G'＝由标准曲线查得空白中二氯二甲吡淀酚的G／ｍｌ值。

R＝回收系数，6.25＝换算系数

5.5　补充说明

5.5.1　若无内标物或内标峰受杂质峰影响时，可用苯提取二氯二甲吡淀甲醚，用外标法定量。

5.5.2　样液测定时，应穿插注入相近浓度经甲基化的标准溶液，以校正标准曲线。

5.5.3　每批阴离子交换树脂使用前，应先做其洗脱曲线，并根据情况适当调节树脂用量和洗脱液体积。

5.5.4　所用水为去离子水

5.5.5　所用容器首先用1：1监酸浸泡0.5H然后用肥皂水洗涤，再用去离水冲净。